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產品說明
Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結構域）。因此，本酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為1.0 kb/ min（72℃）。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型。
活性定義
以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內，將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存
特點
? 無外切酶活性，適合于溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型；
? 熱穩定性好：95℃下半衰期超過40 min；
? 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸；
? 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。
適用范圍
? 溶解曲線法基因分型/SNP測定；
? 血液、組織樣本等直擴PCR；
? DNA熒光標記；
? 菌落PCR；
? TA克隆PCR產物添加3’-dA。
產品包裝規格及組成
Component | AE0121A/ AE0122A* | AE0121B/ AE0122B* | AE0121C/ AE0122C* | AE0121D/ AE0122D* |
Taq-D DNA polymerase | 500U | 500U×5 | 2500U×4 | 2500U×10 |
10×Taq-D Buffer | 1.0 ml×1 | 1.0 ml×5 | 5.0 ml×4 | 5.0 ml×10 |
2 mM dNTPs | -/1.0 ml×1 | -/1.0 ml×5 | -/5.0 ml×4 | -/5.0 ml×10 |
*附帶2mM dNTP混合物。
質量控制
相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
應用舉例
以下反應舉例為50 μl標準PCR體系， 僅供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
Taq-D（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template可參照如下標準（50 μl PCR體系）：
l 人類基因組DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 質粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大腸桿菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反應條件
95℃ | 5 min | |
95℃ |
| |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1-2 kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事項
l 不可用于Taqman探針法q-PCR。
l 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5。
l 建議在冰上配置PCR 反應液后，再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結果。
l 如進行PCR擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體系中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性。
l 本公司Buffer經大量PCR反應實例優化而成，然而對某些PCR反應存在一個最優的鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的Buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 不可用于Taqman探針法q-PCR。
l 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5。
l 建議在冰上配置PCR 反應液后，再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結果。
l 如進行PCR擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體系中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性。
l 本公司Buffer經大量PCR反應實例優化而成，然而對某些PCR反應存在一個最優的鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的Buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
