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產(chǎn)品說明
耐熱 UDG 水解 DNA 鏈中的尿嘧啶堿基和脫氧核糖之間的 N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。本酶可作用于含有 dU的單鏈或雙鏈 DNA，對 RNA 無活性。本酶來源于嗜熱微生物，在高溫下具有更高酶活性。
PCR反應(yīng)的高溫，特別是變性和延伸反應(yīng)階段，會導(dǎo)致dCTP脫氨基生成dUTP，dUTP被聚合酶摻入DNA中形成dU；同時(shí)高溫還會使DNA中的dC堿基脫氨基生成dU堿基。這些DNA中的dU堿基會抑制DNA高忠實(shí)性DNA聚合酶（例如Pfu DNA聚合酶）的活性。因此消除DNA中的dU堿基能夠促進(jìn)高忠實(shí)性DNA聚合酶的擴(kuò)增產(chǎn)量。本公司的高溫UDG酶，能夠耐受95℃高溫，95℃半衰期超過1小時(shí)。因此該高溫UDG使提高高忠實(shí)性DNA聚合酶（例如Pfu DNA聚合酶）擴(kuò)增產(chǎn)量的良好促進(jìn)劑。
本公司高溫UDG是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
在 65℃條件下每分鐘從含尿嘧啶雙鏈 DNA（dU/dA）上催化釋放 60 pmole尿嘧啶所需要的酶量，定義為 1 個(gè)活性單位
活性測定條件
Pfu PCR Buffer：20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1 mg/mL BSA, 0.1% (v/v) Triton X-100, 2 mM MgSO4，65℃溫育。
濃度：2U/ul
保存條件：-20℃
特點(diǎn)
? 熱穩(wěn)定，50-90℃高溫下仍具有酶活性；
? 在多種 PCR酶 buffer中具有活性。
應(yīng)用范圍
? 消除DNA中高溫產(chǎn)生的dU堿基，改善高保真聚合酶擴(kuò)增性能。
? 其它需要高溫下去除dU的實(shí)驗(yàn)操作
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1103A | AE1103B |
高溫UDG | 200U | 1000U |
10×UDG Buffer | 0.5 ml | 1.5 ml |
質(zhì)量控制
無內(nèi)切酶和外切酶活性：50 U 的本酶和1 μg的 pBR322 DNA 在 37℃下反應(yīng) 2 小時(shí)，DNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl (pH7.5),100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween20, 50% glycerol
相關(guān)產(chǎn)品
AE1145: 耐熱核酸內(nèi)切酶 IV
應(yīng)用舉例
改善PCR擴(kuò)增效果的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反應(yīng)液
PCR 組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Pfu酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu DNA聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐熱UDG（2U/μl） | 1.0 | 2U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
2. PCR反應(yīng)。
3. 電泳檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 耐熱UDG酶的反應(yīng)溫度可以在 40℃-95℃ 的范圍內(nèi)變化，建議在 50-70℃反應(yīng)。
l UDG切割含dU堿基的ssDNA活性最高，大概是dU/dA雙鏈DNA的5-10倍，各種底物的活性順序?yàn)椋篸U/dA < dU/dG < dU/dC ≈ dU/dT < ssDNA。
l 長期儲存 (非頻繁使用; 每月 1-2次): -70℃；每天或每周使用: -20℃。盡量避免多次凍融， 切勿暴露在溫度波動(dòng)較大之處。溫度波動(dòng)對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。
l 在用于Pfu DNA聚合酶等高忠實(shí)性DNA聚合酶的PCR反應(yīng)時(shí)，可以于高溫內(nèi)切核酸酶IV共同使用，進(jìn)一步提高DNA擴(kuò)增產(chǎn)量和擴(kuò)增忠實(shí)性。本公司有售超耐熱內(nèi)切核酸酶IV（目錄編號AE1145）。
