產品說明

Pfu DNA Ligase 來源于嗜熱微生物，以 ATP 為輔酶，在 45℃~80℃催化雙鏈 DNA 相鄰 5’ -磷酸和 3’ -羥基端的連接。由于具有較高的耐熱性，允許較高的反應溫度，從而提高了 LCR（連接酶鏈式反應）的忠實性。Pfu DNA 連接酶比 Taq DNA 連接酶具有更高的連接特異性，非常適合于檢測單核苷酸多態性（SNP），例如藥物基因組學的基因分型指導用藥。

本公司Pfu DNA Ligase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。

活性定義

在 20 μl反應體系中，45℃條件下，15分鐘內使 50%經BstEII消化的 1 μg λ DNA片段（12 bp 粘性末端，相當于約 0.0338pmole）發生連接所需要的酶量，定義為 1 個活性單位。

活性測定條件

在 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 0.1% Tween 20, 0.1 mg/ml BSA 中，45℃反應 15min。

濃度：40U/μl

保存條件：-20℃。

特點

? 耐熱性好，兼容 連接酶鏈式反應（ligase chain reaction, LCR）模板預變性步驟；

? 忠實性極高，缺口處錯配堿基對不會被連接

? 可在高溫條件下連接DNA鏈上的切刻位點。

? 與常溫 DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。

? 與 Taq DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。

? 反應溫度范圍為 40-70℃，高溫下特異性和活性增強，反應溫度可接近 80℃。

適用范圍

? 通過連接酶檢測反應和連接酶鏈式反應，檢測等位基因特異性

? 連接酶鏈式反應（LCR）中連接磷酸化寡核苷酸

? 高溫下連接 DNA 鏈上的切刻位點

產品包裝規格及組成

質量控制

相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染和磷酸酯酶，滿足常規連接反應要求。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50% glycerol.

相關產品

AE1310: 9°N DNA ligase

應用實例

1. 連接反應

1）按下表配制反應體系

2）45-50°C連接15min

3）對于較長的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測連接產物；對于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測連接產物。

警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。

注意事項

l 推薦 DNA 5′ 末端濃度為 0.1 μM，55℃ 溫育。

l 高溫下特異性和活性增強，反應溫度可接近 80℃，但注意確保反應溫度下dsDNA底物沒有變成單鏈DNA。

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