產品說明

高鹽型 DNA 連接酶除了具有 DNA 連接酶的其它特點外，具有耐受高濃度鹽的特性。可以催化雙鏈 DNA 中 5’-磷基和 3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵的 DNA 連接酶，以 NAD⁺為輔酶，作為反應的能量來源。只有當寡核苷酸與互補的靶 DNA 完美配對，并且它們之間沒有間隙時，才會發生連接。相比其它 DNA 連接酶，該酶在高鹽濃度下活性更高（配備了 2×buffer，用于增加鹽濃度，提高活性）。

本公司高鹽型 DNA 連接酶是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。

活性定義

在 20 μl 反應體系中，37℃ 條件下，15 分鐘內能使 50% 的 1 μg 經 BstEII 消化的 λ DNA 片段

（12 bp 粘性末端，相當于 0.0338pmole）發生連接所需要的酶量定義為 1 個活性單位。

活性測定條件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 2.4M KCl，25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+ , 10 mM DTT , 0.1% TritonX-100，45℃溫育。

濃度：40U/μl

保存條件：-20℃。

特點

?  耐熱性好；

?  耐受高濃度 KCl

應用范圍：

?   DNA 連接反應

?   SNP 檢測

?   可在超高KCl濃度下連接DNA鏈上的切刻位點

產品包裝規格及組成

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50% glycerol.

相關產品

AE1307: Pfu DNA ligase；AE1308: Taq DNA ligase，AE1310: 9°N DNA ligase

應用實例

1. DNA連接反應

1）按下表配制反應體系

2）37°C連接15min

3）對于較長的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測連接產物；對于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測連接產物。

警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。

注意事項

l  本DNA Ligase 耐受超高濃度KCl，高達2M KCl下仍具有很高活性

l  該酶低鹽濃度下活性較低，建議KCl濃度不低于1M，最好在1.5-2.5M。

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