咨詢熱線：
400-660-9586
產(chǎn)品說明
T7 DNA 連接酶來源于 T7 噬菌體，它是一種 ATP 依賴型雙鏈 DNA 連接酶，該酶可催化雙鏈 DNA 相鄰 5′ 磷酸末端和 3′ 羥基基團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵。T7 DNA 連接酶可以有效地催化粘性末端和缺口的連接。 與 T4 和 T3 DNA 連接酶不同，T7 DNA 連接酶不能有效地催化平末端連接。因此，在實(shí)驗(yàn)過程中，當(dāng)平末端和粘性末端同時存在時，僅需粘性末端發(fā)生連接，T7 DNA 連接酶是理想的選擇。
本公司T7 DNA ligase是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
在 20 μl 1×T7 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液中，25℃ 反應(yīng)條件下，30 分鐘能使 50% 的經(jīng) HindIII 消化的3μg λ DNA 片段 [相當(dāng)于5′ 端濃度為 0.06 μM（150μg/ml）] 連接所需的酶量，定義為 1U。
NEB公司的1 單位指溫度為25℃，20 μ1× T7 DNA ligase Buffer緩沖體系的反應(yīng)條件下，30min內(nèi)能連接50%的被Hind III消化的 100 ng λ DNA片段所需的酶量。因此，本公司 T7 DNA 連接酶濃度是 NEB 公司 T7 DNA 連接酶濃度的 30 倍，與NEB的T3 DNA ligase的活性單位定義相當(dāng)。
活性測定條件
66 mM Tris-HCl，1 mM ATP，10 mM MgCl2，1 mM DTT，7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃)，25℃ 溫育。
濃度：100U/μl
保存條件：-20℃
特點(diǎn)
? 只用于連接粘性末端；
? 熱失活：65℃ 加熱 10min。
適用范圍
? 限制性內(nèi)切酶克隆
? 向dsDNA添加接頭或適配器
? 線性DNA的環(huán)化
? 雙鏈DNA中的缺口封接
? 定點(diǎn)誘變
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1305A | AE1305B |
T7 DNA ligase | 2000U | 10000U |
2× AM Buffer F（Fast DNA Ligase Buffer） | 0.2ml | 1.0ml |
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C。
相關(guān)產(chǎn)品
AE1301: T4 DNA ligase
應(yīng)用實(shí)例
1. 連接酶克隆
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
載體 | 50ng |
基因片段 | 50ng-150ng |
T7 DNA ligase (100U/μl) | 1-2 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2) 如為粘末端連接反應(yīng)，25°C連接3小時，或4°C連接過夜；
3）連接產(chǎn)物直接用于轉(zhuǎn)化（或凍存于-20°C）。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 本產(chǎn)品需要輔助因子ATP參與反應(yīng)
l PEG對所做實(shí)驗(yàn)影響較大時，可使用T4 DNA ligase（AE1301）Buffer，但活性降低10倍，需要維持高NaCl濃度的實(shí)驗(yàn)，不建議使用含PEG的Buffer
l 本產(chǎn)品不適合平末端片段連接，如需連接平末端片段，請使用T4 DNA ligase（AE1301）
