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產品說明
T4 Polynucleotide Kinase催化 Pi 從 ATP 的γ位置轉移和交換到雙鏈/單鏈 DNA 和 RNA，3’ 單磷酸核苷的5’ 羥基端。T4 PNK還催化去除多核苷酸、脫氧核苷3’ 單磷酸和脫氧核苷3’ 二磷酸中的3’ 磷酸基團。T4 PNK活性形式為四聚體，分子量約140 kDa。單個亞基分子量為33kDa。
本公司T4 Polynucleotide Kinase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下， 1× T4 PNK反應緩沖體系下，30 min內將1 nmol ATP上的磷酸基團摻入酸不溶性物質所需的酶量。
活性測定條件
1× T4 PNK Buffer：70 mM Tris-HCl ，10 mM MgCl2， 5 mM DTT(pH 7.6 @ 25°C)，37℃溫育。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? DNA / RNA的5'磷酸化，用于隨后的連接
? 末端標記DNA或RNA用于探針雜交和DNA測序
? 去除3'磷酸基團
產品包裝規格及組成
Component | AE1001A | AE1001B |
T4 Polynucleotide Kinase | 500U | 2500U |
10× T4 Polynucleotide Kinase Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl， 50 mM KCl， 1 mM DTT， 0.1 mM EDTA， 50% Glycerol ，0.1 μM ATP
pH 7.4 @ 25°C
相關產品
AE1301: T4 DNA ligase
應用實例
1. 引物或PCR產物磷酸化
1）按下表配制反應體系
反應組分 | ul |
10× Buffer | 5 |
ATP（50mM） | 0.5-1 |
待磷酸化引物（100uM）或PCR產物 （100ng/ul） | 20 |
T4 Polynucleotide Kinase (10U/μl) | 2 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2）37℃×30-60 min反應，
3）65℃×20min失活酶
后續應用實驗包括：
1）磷酸化引物進行PCR擴增，制備5’磷酸化修飾的PCR產物
2）磷酸化PCR產物進行DNA連接反應等
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 缺口（gap）可以被高濃度ATP磷酸化。 切口（nick）不能被有效地磷酸化。 CTP，GTP，TTP，UTP，dATP或dTTP可以替代ATP作為磷酸基團供體。
l 交換反應可以避免5’P末端去磷酸化，不過會導致較低的同位素32P標記比活。
l 反應需要Mg2+和SH試劑如DTT等輔因子參與。
l 7 mM的磷酸、焦磷酸鹽或磷酸鈉抑制酶50%的活性，7 mM的硫酸銨抑制酶75%的活性。
