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產品說明
核糖核酸酶H（RNase H）是一種核糖核酸內切酶，它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA 的磷酸二酯鍵。該酶不能消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA。主要用于cDNA第二鏈合成時除去 mRNA ；以及一步法RT-PCR中去除mRNA鏈，生成cDNA單鏈，提高cDNA與引物的配對效果，改善RT-PCR效果。
本公司RNase H是重組表達，并經多步純化制備的大腸桿菌RNase H重組蛋白。
活性定義
1單位指在溫度為37℃，1× RNase H 反應緩沖體系的條件下，20min內能水解20 pmol熒光標記的50 bp RNA-DNA雜交鏈成1 nmol核苷酸所需的酶量。
活性測定條件
50 mM Tris-HCl，75 mM KCl，3 mM MgCl2，10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃)，37℃溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存
特點
? 不消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA
? 熱失活：65℃×20 分鐘
適用范圍
? 除去雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)
產品包裝規格及組成
Component | AE2351A | AE2351B |
RNase H | 250U | 1250U |
10× RNase H Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA，50% Glycerol ，pH 7.4 @ 25°C。
應用實例
1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反轉錄產物 | 100-200ng |
RNase H (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶(5U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 35°C反應5-10min；
3) PCR反應。
4) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行后續實驗
2、cDNA第二鏈合成時除去 mRNA
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× EcDNApol Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反轉錄產物 | 100-200ng |
RNase H (5U/ul) | 1 |
Ec DNA聚合酶大片段(10U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 35°C反應15-30min；
3) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行后續實驗
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 本RNase H為常溫酶，在16-42℃范圍內具有高活性，最佳反應溫度為32-37℃。
l 本酶不耐高溫，因此反應溫度不能高于42℃。
