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產品說明
RNase T又稱為核酸外切酶T（Exo T），是一種單鏈RNA或DNA特異性核酸酶，該酶需要游離的3′ 末端，以3′ →5′ 方向去除核苷酸。核酸外切酶T對于DNA的活性比RNA高十倍。核酸外切酶T可用于含有3′ 突出末端的RNA或DNA的末端平滑化。常溫酶，65°C保溫20min失活。
本公司RNase T是重組表達，并經多步純化制備的大腸桿菌RNase T重組蛋白。
活性定義
1單位指在溫度為25℃，1× AM Buffer D反應緩沖體系的條件下，30 min內水解1 nmol [3H]-標記的多聚胸腺嘧啶成0.1 nmol 三氯乙酸可溶的核苷酸所需的酶量。
活性測定條件
AM Buffer D，25°C 溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存
特點與適用范圍
? 去除雙鏈DNA的3’突出末端，形成平末端。
產品包裝規格及組成
Component | AE2262A | AE2262B |
RNase T | 200U | 1000U |
10 × AM Buffer D | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 μg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.4@ 25°C。
應用實例
1、 3’突出端DNA的末端平滑化
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 5 |
3’突出端DNA產物 | 40 |
RNase T | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 25-37°C反應30min；
3) 80°C加熱20min，使酶失活。
4) 進行后續實驗
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l Exo T對DNA和RNA的反應效率不同，DNA是RNA的100倍。對于 RNA，在標準反應條件下，完全消化1.0 pmole rA20需要1單位 Exo T，反應結果通過凝膠電泳檢測。
l 在溫度45度以下都有活性，雖然活性測定溫度為25度，但在25-37度范圍內活性更高。
