咨詢熱線：
400-660-9586
產(chǎn)品說明
Tth RNase HII 是一種內(nèi)切核糖核酸酶，特異性切割DNA雙鏈中RNA堿基5’端的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生切口，產(chǎn)生5’磷酸和3’羥基末端。RNaseHII還將沿著岡崎片段的RNA部分切割多個位點（即RNase H 活性）。該酶不水解純DNA鏈、單鏈RNA。
本公司RNase HII是重組表達，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
在55°C，1× AM Buffer E緩沖液中，30分鐘內(nèi)切斷100pmole含有單個核糖核苷酸的雙鏈DNA底物所需酶量。
活性測定條件
AM Buffer E ，55℃溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃
特點
? 耐熱酶，在40-75度均有活性
? 同時具有RNase H活性
適用范圍
? 切割含有核糖核苷酸的雙鏈DNA
? 當(dāng)與T7 Endo I一起使用時，在摻入的核糖核苷酸的位點產(chǎn)生雙鏈斷裂
? 岡崎氏片段RNA部分的降解
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE2353A | AE2353B |
Tth RNase HII | 250U | 1250U |
10× AM Buffer E （Polymerase Buffer） | 0.3ml | 1.5ml |
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
注意事項
l 與RNaseH相比，RNaseHII表現(xiàn)出較低的RNase H活性
l 岡崎片段優(yōu)先在RNA/DNA序列交界處的核糖核酸處產(chǎn)生5’缺口
l 與RNA/DNA底物或Okazaki片段相比，RNase HII更偏好含有單個核苷酸的dsDNA雙鏈
l 0.1%SDS高溫溫育足以滅活Tth核糖核酸酶HII。
應(yīng)用實例
1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 | 100-200ng |
Tth RNase HII (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶 (5U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 65°C反應(yīng)5-10min；
3) PCR反應(yīng)。
4) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行后續(xù)實驗
2、dsDNA中單一核糖的切割
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
含單一RNA堿基的dsDNA | 10-50pmole |
Tth RNase HII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2) 50-65°C反應(yīng)15-30min；
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測dsDNA切割結(jié)果，或進行后續(xù)實驗
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實驗使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項
l 與RNaseH相比，RNaseHII表現(xiàn)出較低的RNase H活性
l 岡崎片段優(yōu)先在RNA/DNA序列交界處的核糖核酸處產(chǎn)生5’缺口
l 與RNA/DNA底物或Okazaki片段相比，RNase HII更偏好含有單個核苷酸的dsDNA雙鏈
l 0.1%SDS高溫溫育足以滅活Tth核糖核酸酶HII。
