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產(chǎn)品說明
RNase HII 是一種內(nèi)切核糖核酸酶，在DNA雙鏈的背景下，它優(yōu)先將5‘端剪斷到一個(gè)核糖核酸上。該酶留下5’磷酸和3’羥基末端。RNase HII還將沿著岡崎片段的RNA部分切割多個(gè)位點(diǎn)。
本公司RNase HII是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
37℃、1× AM BufferB反應(yīng)緩沖體系下，30 min內(nèi)切斷100 pmole含有單個(gè)核糖核苷酸的合成雙鏈DNA所需的酶量。
活性測(cè)定條件
AM BufferB，100ug/ml BSA，37℃溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融
特點(diǎn)與適用范圍
? 切割含有核糖核苷酸的dsDNA產(chǎn)物
? 當(dāng)與T7 Endo I一起使用時(shí)，在摻入的核糖核苷酸的位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈斷裂
? 岡崎片段RNA部分的降解
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE2354A | AE2354B |
RNase HII | 250U | 1250U |
10× AM BufferB | 0.3ml | 1.5ml |
質(zhì)量控制
經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
應(yīng)用實(shí)例
1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 | 100-200ng |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶 (5U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 37°C反應(yīng)5-10min；
3) PCR反應(yīng)。
4) 瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA，或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
2、dsDNA中單一核糖的切割
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
含單一RNA堿基的dsDNA | 10-50pmole |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2) 37°C反應(yīng)15-30min；
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測(cè)dsDNA切割結(jié)果，或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
3、與T7 Endo I一起在dsDNA核糖核苷酸的位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈斷裂
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 3 |
含單一RNA堿基的dsDNA | 10-50pmole |
T7 endo I (10U/ul) | 1 |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 30 |
2) 37°C反應(yīng)15-30min；
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測(cè)dsDNA切割結(jié)果，或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 與RNaseH相比，RNaseHII表現(xiàn)出較低的RNA/DNA雜交鏈內(nèi)切酶活性
l 岡崎片段優(yōu)先在RNA/DNA序列交界處的核糖核酸處產(chǎn)生5’缺口
l 與RNA/DNA雜交底物或Okazaki片段相比，RNaseHII更喜歡含有單個(gè)核苷酸的雙鏈DNA
l 0.1%SDS孵育足以滅活核糖核酸酶HII。
