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產品說明
RNase HIII 是一種內切核糖核酸酶，與RNase HII類似，特異性切割DNA雙鏈中RNA堿基5’端的磷酸二酯鍵，產生切口，產生5’磷酸和3’羥基末端。RNaseHII還將沿著岡崎片段的RNA部分切割多個位點（即RNase H 活性）。該酶不水解純DNA鏈、單鏈RNA。RNase HIII 偏好Mn2+離子，RNase HII偏好Mg2+離子。
本公司RNase HIII是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
在37°C，1× AM Buffer E緩沖液中，30分鐘內切斷100pmole含有單個核糖核苷酸的雙鏈DNA底物所需酶量。
活性測定條件
AM Buffer E ，37℃溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃
特點
? 偏好Mn2+離子
? 同時具有RNase H活性
適用范圍
? 切割含有核糖核苷酸的雙鏈DNA
? 當與T7 Endo I一起使用時，在摻入的核糖核苷酸的位點產生雙鏈斷裂
? 岡崎氏片段RNA部分的降解
產品包裝規格及組成
Component | AE2355A | AE2355B |
RNase HIII | 200U | 1000U |
10× AM Buffer E （Polymerase Buffer） | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
應用實例
1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反轉錄產物 | 100-200ng |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶 (5U/ul) | 2.5U |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 37°C反應5-10min；
3) PCR反應。
4) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行后續實驗
2、dsDNA中單一核糖的切割
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
含單一RNA堿基的dsDNA | 10-50pmole |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2) 37°C反應15-30min；
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測dsDNA切割結果，或進行后續實驗
3、與T7 Endo I一起在dsDNA核糖核苷酸的位點產生雙鏈斷裂
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 3 |
含單一RNA堿基的dsDNA | 10-50pmole |
T7 endo I (10U/ul) | 1 |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 30 |
2) 37°C反應15-30min；
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測dsDNA切割結果，或進行后續實驗
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 與RNaseH相比，RNaseHIII表現出較低的RNase H活性
l 岡崎片段優先在RNA/DNA序列交界處的核糖核酸處產生5’缺口
l 與RNase HII偏好Mg2+離子不同，RNase HIII 偏好Mn2+離子
l 與RNA/DNA雜化底物或岡崎片段相比，RNase HIII更喜歡含有單個核苷酸的dsDNA雙鏈
