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產品說明
耐熱 dUTPase 來源于嗜熱微生物，能夠水解 dUTP 生成 dUMP，從而消除 PCR 反應過程中產生的少量dUTP對 PCR的抑制作用。在 DNA聚合酶反應體系中，dCTP會自發(fā)進行脫氨基作用形成 dUTP，dUTP 抑制某些 DNA 聚合酶（特別是高忠實性DNA聚合酶）的活性，加入 dUTPase 可以消除 dUTP 對DNA聚合酶的抑制作用。dUTPase 的加入提高了 PCR 的產率、擴增片段長度和保真性，尤其在高保真性 DNA 聚合酶的 PCR 中非常實用。
本公司Thermostable dUTPase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。比活性約為1.0×106U/mg。
活性定義
1活性單位指在85℃下，60 min催化10 nmol dUTP轉化為dUMP所需的酶量。
濃度：0.1μg/ul（100U/ul）
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? 提高 PCR 產量：由于減少了 dUTP 摻入引起的擴增抑制，能夠顯著提高 Pfu DNA 聚合酶等的擴增產量。
? 提高保真性：由于產量提高，用更少的循環(huán)可以獲得有效擴增，進而減少突變機會。
? 增加擴增長度：dUTPase 的加入增加了擴增片段的長度。
產品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1821A | AE1821B | AE1821C |
Thermostable dUTPase | 10μg | 50μg | 200μg |
10× dUTPase Buffer | 0.3ml | 1.5ml | 5ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25°C
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
應用舉例
按如下表格配制PCR反應液
體積/μl | 終濃度 | |
10×Pfu 聚合酶 Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物 R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu 聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐熱 dUTPase（5U/μl） | 1.0 | 100ng |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
按常規(guī)程序進行PCR反應。
注意事項
l 50μl PCR反應體系中加入1ul dUTPase (擴增目的片段小于3.0kb時) 或 2ul的 dUTPase (擴增目的片段大于3.0kb時)。
l 高濃度的 dUTPase可能會抑制 PCR反應。
