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產品說明
Lambda 核酸外切酶來源于lambda噬菌體，作用于雙鏈 DNA，沿 5′→3′ 方向逐步切去 5′ 單核苷酸。最適底物是 5′ 磷酸化的雙鏈 DNA，也能緩慢降解單鏈 DNA 和非磷酸化雙鏈DNA底物。降解非磷酸化雙鏈DNA，單鏈DNA底物的效率分別只有磷酸化雙鏈DNA的5%、1%。該酶不能從 DNA 的切刻或缺口處起始消化。
本公司lambda exonuclease是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下，1× lambda exonuclease反應緩沖體系下，30 min內從5’ 磷酸化的雙鏈DNA中水解產生10 nmol 酸可溶性脫氧核糖核苷酸所需的酶量。
活性測定條件
1× lambda exonuclease：67 mM Glycine-KOH ，2.5 mM MgCl2 ，50 μg/ml BSA (pH 9.4 @ 25°C)
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點
? 高效的DNA特異性5’→3’ 核酸外切酶活性
? 底物偏好性：5’P雙鏈DNA > 5’OH 雙鏈DNA >> 單鏈DNA
適用范圍
? 從5’ 端高效降解平末端或帶缺口的雙鏈DNA，生成單鏈DNA
? 優選底物是5’ -磷酸化的雙鏈DNA。
產品包裝規格及組成
Component | AE2101A | AE2101B |
lambda exonuclease | 1000U | 5000U |
10× lambda exonuclease Buffer | 1ml | 5ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
25 mM Tris-HCl ，50 mM NaCl ，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol ，pH 8 @ 25°C
相關產品
AE2102: Exonuclease III
應用實例
1. 單鏈DNA制備
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 5 |
*一條鏈為5’磷酸化修飾的雙鏈DNA | 1-5ug |
lambda exonuclease(5U/μl) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 37°C反應30min；
3) 75°C加熱10min，使酶失活；
4) 電泳檢測DNA消化程度。
*若只有1條鏈為5’磷酸化修飾的線性雙鏈DNA，則水解產物主要為單鏈DNA，可以用來制備單鏈DNA。若2條鏈都是5’磷酸化修飾的線性雙鏈DNA，則水解產物主要為單核苷酸，即DNA完全水解。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 若底物為只有1條鏈為5’磷酸化修飾的線性雙鏈DNA，則水解產物主要為單鏈DNA，可以用來制備單鏈DNA；若底物為兩條鏈都是5’磷酸化修飾的線性雙鏈DNA，則水解產物主要為單核苷酸，即DNA完全水解。
l Lambda外切核酸酶在各種緩沖液中的活性：
AM Buffer A 15％；AM Buffer B 40％；AM Buffer C 10％；AM Buffer D 40％；AM Buffer D2 50％；核酸外切酶I反應緩沖液 100％；Thermopol反應緩沖液 100％
l 5’ -OH末端的消化速度比5’ -P末端慢20倍。ssDNA的消化速度比dsDNA慢100倍。
