咨詢熱線：
400-660-9586
產(chǎn)品說(shuō)明
PNGase F是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖，切割位點(diǎn)為：最內(nèi)側(cè)的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。PNGase F還提供不含甘油的形式，便于在HPLC方法中取得最佳效果。
本公司PNGase是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下， 1×PNGase反應(yīng)緩沖體系下，60 min內(nèi)將10 μg變性RNase B中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量。糖基化RNase B分子量約17,000 Da，去糖基后約13,683 Da。
活性測(cè)定條件
1× PNGase Buffer：糖蛋白變性緩沖液（含0.1% SDS，10 mM DTT）、1×GlycoBuffer 2緩沖液、1% NP-40，37℃反應(yīng)1小時(shí)。
糖蛋白于1×糖蛋白變性緩沖液（含0.5% SDS，40mM DTT）中100℃ 煮沸10分鐘使其變性。
濃度：500U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融
特點(diǎn)與應(yīng)用
? 糖蛋白的N-連接糖的去糖基化
? PNGase F 幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-連接糖。
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE6106A | AE6106B |
PNGase | 15 kU | 75 kU |
10×PNGase Buffer | 0.5 ml | 1.5 ml |
10% NP40（10×） | 0.5 ml | 1.5 ml |
10×糖蛋白變性Buffer | 0.5 ml | 1.5 ml |
質(zhì)量控制
經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25°C
反應(yīng)緩沖液
10×PNGase Buffer：500 mM Sodium Phosphate (pH 7.5 @ 25°C)
其它緩沖液
10×糖蛋白變性緩沖液（Glycoprotein Denaturing Buffer）：5% SDS，400 mM DTT
10×NP-40：10% NP-40。
使用實(shí)例：
1. 非變性糖蛋白的去糖基化
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×PNGase Buffer | 2 ul |
糖蛋白 | X ul |
酶(500U/μl) | 1-2 ul |
H2O | Y ul |
總體積 | 20 ul |
2）37℃×4-24 h反應(yīng)，
3）75℃×15min失活酶，
4）SDS-PAGE電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物，或按實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行后續(xù)操作。
2. 變性糖蛋白的去糖基化
1) 按下列條件制備變性的糖蛋白底物
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×糖蛋白變性Buffer | 2 ul |
糖蛋白 | 2-20ug |
H2O | Y ul |
總體積 | 20 ul |
100度加熱10 min變性糖蛋白，然后放在冰上冷卻5 min，最后離心10秒
2）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×PNGase Buffer | 2 ul |
10% NP40 | 2 ul |
變性糖蛋白 | 2-20ug |
酶(500U/μl) | 1-2 ul |
H2O | Y ul |
總體積 | 20 ul |
2）37℃×60min反應(yīng)，
3）75℃×15min失活酶，
4）SDS-PAGE電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物，或按實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行后續(xù)操作。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反應(yīng)混合物中必須加入終濃度1%的NP-40。
l 要使天然糖蛋白去糖基化，建議增加酶量并延長(zhǎng)溫育時(shí)間。
