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產(chǎn)品說明

核酸內(nèi)切酶 IV來源于大腸桿菌，是一種脫嘌呤/脫嘧啶（AP）位點(diǎn)特異性的核酸內(nèi)切酶，在DNA 上的完整 AP 位點(diǎn)的5’端第一個(gè)磷酸二酯鍵處切割DNA，產(chǎn)生 3′ 羥基和 5′ 脫氧核糖磷酸末端。除天然的AP位點(diǎn)外，各種人工合成的Spacer分子也能夠被內(nèi)切核酸酶IV有效切割，包括THF、Spacer C3、Spacer C12、Spacer 9，Spacer 18等。該酶也具有 3′ 二酯酶活性，能從 DNA 的 3′ 末端釋放磷酸甘油醛（phosphoglycoaldehyde）、α,β-不飽和醛（α,β-unsaturated aldehydes）、3’-磷酸、其它3' blocking groups。該酶還能夠作用于 DNA 分子上的幾種氧化性損傷，水解氧化損傷堿基的5’端第一個(gè)磷酸二酯鍵。 同時(shí)內(nèi)切核酸酶IV還具有3’-5’外切核酸酶活性，該活性弱于AP位點(diǎn)特異性的內(nèi)切酶活性。

本公司內(nèi)切核酸酶IV是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的大腸桿菌內(nèi)切核酸酶IV。

活性定義

1 活性單位指在37℃，1小時(shí)切割 1 pmol 含一個(gè) AP 位點(diǎn)的 34 mer 寡核苷酸雙鏈所需要的酶量。

活性測(cè)定條件

1×AM Buffer C：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃），37℃ 溫育。

AP 位點(diǎn)底物制備方法如下：37℃ 條件下，用 1 單位尿嘧啶-DNA 糖苷酶（UDG）處理 10 pmol 含一個(gè)尿嘧啶堿基的 34 mer 寡核苷酸雙鏈 2 分鐘。

濃度：10U/ul。

保存條件：-20℃保存

特點(diǎn)與應(yīng)用

? 細(xì)胞凝膠電泳（彗星試驗(yàn)）

? DNA損傷檢測(cè)

? 切斷DNA中的各種Spacer分子

? RPA等溫?cái)U(kuò)增中熒光探針切割 ，釋放熒光信號(hào)

? 熱失活：85℃ 加熱 20 分鐘。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶 IV 經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25°C

l 相關(guān)產(chǎn)品

AE1101: EcUDG

應(yīng)用舉例

切斷單鏈或雙鏈DNA中的Spacer的磷酸二酯鍵

按如下表格配制反應(yīng)液

37°C反應(yīng)30-60min。

75°C加熱15分鐘，失活酶。

8M尿素變性PAGE電泳檢測(cè)切割效果。

警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

注意事項(xiàng)

l 彗星試驗(yàn)的推薦稀釋度：1:10⁴至1:10⁵。

l Endo IV在AM Buffer B中活性為100%，在AM Buffer D1中活性為25%。不建議在AM Buffer A中使用Endo IV。

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