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產品說明
Tte AP熱穩定核酸酶來源于嗜熱溫泉tengcongensis，該酶識別缺嘌呤/缺嘧啶位點（Apurinic/ apyrimidinic）核苷酸，其內切酶活性將受損DNA損傷位點進行切斷，然后在其外切酶（3’-5’）活性下去除受損DNA位點，完成DNA的損傷修復。除天然的AP位點外，各種人工合成的Spacer分子也能夠被內切核酸酶IV有效切割，包括THF、Spacer C3、Spacer C12、Spacer 9，Spacer 18等。該酶也具有 3′二酯酶活性，能從 DNA 的 3′末端釋放磷酸甘油醛（phosphoglycoaldehyde）、α,β-不飽和醛（α,β-unsaturated aldehydes）、3’-磷酸、其它3' blocking groups。該酶還能夠作用于 DNA 分子上的幾種氧化性損傷，水解氧化損傷堿基的5’端第一個磷酸二酯鍵。 另外，該酶還具有3′-5′的外切酶活性。酶活性受到金屬離子、DTT、EDTA等的影響，優先作用于3′凹末端的雙鏈DNA。Tte AP熱穩定核酸酶酶極其耐熱，最佳反應溫度為70℃。
本公司Tte 核酸內切酶 IV是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1單位指在溫度為65℃反應條件下，60min內能切割1pmol 含一個 AP 位點的34 mer寡核苷酸雙鏈所需的酶量。
活性測定條件
1×Tte AP Buffer：20 mM Tris，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? 與高溫UDG一起改善高忠實性DNA聚合酶PCR擴增性能
? 單細胞凝膠電泳（彗星試驗）
? DNA損傷修復與檢測
? 切斷DNA中的各種Spacer
產品包裝規格及組成
Component | AE1144A | AE1144B |
Tte 核酸內切酶 IV | 500U | 2500U |
1×Tte AP Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，150mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8.0
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AE1103: Thermostable UDG
應用舉例
改善PCR擴增效果的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反應液
PCR 組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Pfu酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu DNA聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐熱UDG（2U/μl） | 1.0 | 2U |
Tte內切核酸酶IV（10U/μl） | 1.0 | 10U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
2. PCR反應。
3. 電泳檢測PCR擴增反應
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 該酶的最佳反應溫度為65-70°C。該酶與PCR反應條件兼容。
l 本酶為高溫酶，不能直接熱失活。若需失活該酶可以進行酚氯仿抽提，或加入終濃度50mM EDTA并在95℃ 加熱 20 分鐘。
l 本酶有高濃度包裝（200U/ul），在用于改善PCR擴增效果時建議使用高濃度包裝，且每個PCR反應加入量為20-200U。
l 用于改善PCR擴增效果時，其原理如下：高溫UDG切除dU堿基產生無堿基AP位點，高溫內切核酸酶IV斷裂AP位點，并由DNA聚合酶進行延伸，修復成全長DNA片段。
l 本酶活性隨溫度升高而增強，具體應用建議在不同溫度下摸索酶具體用量。
