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產品說明
E. coli Poly(A) 聚合酶以單鏈RNA作為引物，ATP作為底物進行聚合反應。即能夠在沒有模板的指導下，將ATP以AMP的形式添加到RNA的3’端，通常可以在3’末端加入20~200個連續的AMP，形成俗稱的polyA尾巴。該3’ polyA尾巴可增強mRNA的穩定性。在本身不帶polyA尾巴的RNA（例如microRNA）的3’端加上polyA尾巴，可以為cDNA合成提供oligo-dT引物結合位點等。
本公司E.coli Poly(A) polymerase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下，1× Poly(A) Polymerase反應緩沖體系下，10 min內將1 nmol AMP摻入16nt的ssRNA所需的酶量。
活性測定條件
50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，10 mM MgCl2，加入1 mM ATP，(pH 7.9 @ 25℃)，37℃溫育。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與應用
? RNA的3’標記
? microRNA加polyA尾巴，為cDNA合成提供oligo-dT引物結合位點
? 體外轉錄RNA分子3’ polyA加尾，增強RNA穩定性，提高轉染至細胞中RNA翻譯效率
? 用5’三磷酸化蟲草素（cordycepin 5′-triphosphate）或ATP標記RNA
? 為RNA添加Poly(A)尾，用于克隆或親和純化
產品包裝規格及組成
Component | AE0901A | AE0901B |
E.coli Poly(A) polymerase | 100U | 500U |
10×Poly(A) polymerase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
10 mM ATP | 0.2ml | 0.2ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，1 mM DTT，1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1% (v/v) Triton? X-100，pH 7.5 @ 25°C
使用實例：
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2ul |
10mM ATP | 2 |
單鏈RNA | Xul,1-10ug |
酶( 5 U/μl) | 1-2ul |
H2O | Yul |
總體積 | 20ul |
2）37℃×10min反應，
3）65℃×20min失活酶，
4）尿素變性PAGE電泳檢測酶切產物，或按實驗目的進行后續操作。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 不同的實驗需要加 A 的量會有所不同，可通過減少反應時間來調整加A的長度。
l 熱失活：65℃×20 min。
l 可以在反應體系中加入核酸酶抑制劑來防止RNA的降解
