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產(chǎn)品說(shuō)明
Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來(lái)源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。因此，本酶具有5’→3’聚合酶活性，無(wú)5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/ min（72℃）。不可用于Taqman探針?lè)?/span>q-PCR。本酶尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型。
活性定義
以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個(gè)活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存
特點(diǎn)
? 無(wú)外切酶活性，適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型；
? 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過(guò)40 min；
? 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸；
? 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。
適用范圍
? 溶解曲線法基因分型/SNP測(cè)定；
? 血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR；
? DNA熒光標(biāo)記；
? 菌落PCR；
? TA克隆PCR產(chǎn)物添加3’-dA。
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE0121A/ AE0122A* | AE0121B/ AE0122B* | AE0121C/ AE0122C* | AE0121D/ AE0122D* |
Taq-D DNA polymerase | 500U | 500U×5 | 2500U×4 | 2500U×10 |
10×Taq-D Buffer | 1.0 ml×1 | 1.0 ml×5 | 5.0 ml×4 | 5.0 ml×10 |
2 mM dNTPs | -/1.0 ml×1 | -/1.0 ml×5 | -/5.0 ml×4 | -/5.0 ml×10 |
*附帶2mM dNTP混合物。
質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無(wú)外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA。
室溫放置一周，擴(kuò)增活性無(wú)明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長(zhǎng)期放置，用畢放回-20度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
應(yīng)用舉例
以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系， 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
Taq-D（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl PCR體系）：
l 人類基因組DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 質(zhì)粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大腸桿菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反應(yīng)條件
95℃ | 5 min | |
95℃ |
| |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1-2 kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事項(xiàng)
l 不可用于Taqman探針?lè)?span style="font-family: "Times New Roman";">q-PCR。
l 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過(guò)程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。
l 建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后，再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的PCR結(jié)果。
l 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的酶用量，以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。
l 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成，然而對(duì)某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)最優(yōu)的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請(qǐng)購(gòu)買本公司不含鎂離子的Buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
