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產(chǎn)品說明
本酶為Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq）的熱啟動(dòng)版本，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活。本酶為重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來源的基因工程改造的外切酶活性缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。本酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。擴(kuò)增片段的長度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/min（72℃）。本酶不可用于Taqman探針法q-PCR。尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型。同時(shí)，較適合擴(kuò)增血液等含PCR抑制劑的樣本。
活性定義
以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個(gè)活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存
特點(diǎn)
? 本酶為熱啟動(dòng)聚合酶，可提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體；
? 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR；
? 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過40 min；
? 模板DNA耐受范圍廣；
? PCR產(chǎn)物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克??；
? 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸。
適用范圍
? 溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型
? 血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR
? DNA熒光標(biāo)記
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE0125A/ AE0126A* | AE0125B/ AE0126B* | AE0125C/ AE0126C* | AE0125D/ AE0126D* |
HS Taq-D DNA polymerase | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×Taq-D Buffer | 0.5 ml×1 | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×2 | 5.0 ml×5 |
2 mM dNTPs | -/0.5 ml×1 | -/1.0 ml×3 | -/5.0 ml×2 | -/5.0 ml×5 |
*附帶2mM dNTP混合物。
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
室溫放置一周，擴(kuò)增活性無明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
應(yīng)用舉例
以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系， 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS Taq-D（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl PCR體系）：
人類基因組DNA | 0.1 μg-1 μg |
λDNA | 0.5 ng-5 ng |
質(zhì)粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
大腸桿菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反應(yīng)條件
95℃ | 5 min | |
95℃ |
| |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1 min/kb | |
72℃ | 5 min |
注意事項(xiàng)
l 本酶為熱啟動(dòng)聚合酶，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活；因此有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體，得到良好的PCR結(jié)果。
l Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在PCR產(chǎn)物3’末端通常會(huì)加上1個(gè)多余的腺嘌呤。
l 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。
l 對非熱啟動(dòng)酶而言，建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后，再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的PCR結(jié)果。
l 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的酶用量，以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。
l 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成，然而對某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)最優(yōu)的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
