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產品說明：
本酶為HiFi Taq DNA 聚合酶的熱啟動版本，需 95 度加熱 5 分鐘或 98 度加熱 2 分鐘而激活。可提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體。HiFi Taq DNA 聚合酶基于Barnes方法開發的高效率PCR酶。將具有強3'→5'核酸外切酶活性（proof-reading活性）的KOD DNA polymerase與Taq DNA polymerase以最佳比例混合，從而實現了卓越的PCR性能,并提高了保真性。兩種酶均經特殊改造，具有超強擴增能力和延伸速度，擴增片段的長度可達 5-6 kb，延伸速度為 1-2 kb/ min（72℃）。該酶具有 5’→3’聚合酶活性，較弱的 5’→3’外切酶活性；優化的3’→5’外切酶活性。少量擴增產物具有 3'-dA 尾巴。
以大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，在 72℃、30 min 內，將 10 nmol 脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存特點
? 經特殊改造，擴增能力強 2kb/min 條件下可有效擴增 3-5kb 的 DNA 片段；
? 可提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體。
? 熱穩定性好：95℃下半衰期超過 40 min；
? 少量PCR 產物具有 3’-dA 尾巴，直接進行 T/A 克隆效率稍低；
? 模板 DNA 耐受范圍廣。
適用范圍
? 常規 PCR 擴增；
? 菌落 PCR；
? Multiplex PCR；
? DNA 熒光標記。產品包裝規格及組成
Component | AE0111A/ AE0112A* | AE0111B/ AE0112B* | AE0111C/ AE0112C* | AE0111D/ AE0112D* |
Taq DNA polymerase | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×HiFi Taq Buffer | 0.5 ml×1 | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×2 | 5.0 ml×5 |
2 mM dNTPs | -/0.5 ml×1 | -/1.0 ml×3 | -/5.0 ml×2 | -/5.0 ml×5 |
*附帶 2mM dNTP 混合物。質量控制
相關測試表明無外源內切或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR 方法檢測無宿主殘余 DNA。
室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20 度。酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween
20, and 50% glycerol.
注：以下反應舉例為 50 μl 標準PCR 體系，僅供參考。實際PCR 條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS HiFi Taq（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template 可參照如下標準（50 μl PCR 體系）：
l 人類基因組 DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 質粒 DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大腸桿菌 DNA | 10 ng-100 ng |
PCR 反應條件
95℃ | 5 min | |
95℃ | 15 sec | |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1-2kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事項
l HS HiFi Taq DNA 聚合酶雖然具有脫氧核苷酸轉移酶活性，可以在 PCR 產物 3’末端通常會加上 1 個多余的腺嘌呤，但含有的少量KOD聚合酶具有很強的3’-5’外切酶活性，因此PCR產物3’-A的比例較低。
l 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。HS HiFi Taq DNA 聚合酶的堿基錯誤率為 3×10-5。
l 建議在冰上配置 PCR 反應液后，再放入PCR 儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性， 減少非特異性擴增，得到良好的PCR 結果。
l 如進行 PCR 擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體系中的 HS HiFi Taq 酶用量， 以增加 PCR 擴增反應的特異性。
l 本公司 Buffer 經大量 PCR 反應實例優化而成，然而對某些PCR 反應存在一個最優的鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的 buffer 和 MgCl2/MgSO4。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
