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產(chǎn)品說明：
Taq DNA 聚合酶是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌 Thermus aquaticus 來源的熱穩(wěn)定型 Taq DNA 聚合酶，分子量為 94 kDa。本酶經(jīng)特殊改造，具有超強(qiáng)擴(kuò)增能力和延伸速度，擴(kuò)增片段的長度可達(dá) 5-6 kb，延伸速度為 2-3 kb/ min（72℃）。該酶具有 5’→3’聚合酶活性，較弱的 5’→3’外切酶活性；無 3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有 3'-dA 尾巴。Taq DNA Polymerase for PAGE 配有特殊的緩沖液，其PCR產(chǎn)物適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳與瓊脂糖凝膠電泳。
以大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，在 72℃、30 min 內(nèi)，將 10 nmol 脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個(gè)活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存特點(diǎn)
? 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過 40 min；
? PCR 產(chǎn)物具有 3’-dA 尾巴，可直接用于 T/A 克隆；
? 模板 DNA 耐受范圍廣；
? 可以摻入 dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸。適用范圍
? 常規(guī) PCR 擴(kuò)增；
? 菌落 PCR；
? TA 克隆 PCR 產(chǎn)物添加 3’-dA；
? DNA 熒光標(biāo)記。產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE0117A/ AE0118A* | AE0117B/ AE0118B* | AE0117C/ AE0118C* | AE0117D/ AE0118D* |
Taq DNA polymerase for PAGE | 500U | 500U×5 | 2500U×4 | 2500U×10 |
10×Taq Buffer for PAGE | 1.0 ml×1 | 1.0 ml×5 | 5.0 ml×4 | 5.0 ml×10 |
2 mM dNTPs | -/1.0 ml×1 | -/1.0 ml×5 | -/5.0 ml×4 | -/5.0 ml×10 |
*附帶 2mM dNTP 混合物。質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無外源內(nèi)切或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR 方法檢測(cè)無宿主殘余 DNA。
室溫放置一周，擴(kuò)增活性無明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20 度。酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween
20, and 50% glycerol.
注：以下反應(yīng)舉例為 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)PCR 體系，僅供參考。實(shí)際PCR 條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
Taq（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template 可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl PCR 體系）：
l 人類基因組 DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 質(zhì)粒 DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大腸桿菌 DNA | 10 ng-100 ng |
PCR 反應(yīng)條件
95℃ | 5 min | |
95℃ | 15 sec | |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1-2kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事項(xiàng)
l Taq DNA 聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在 PCR 產(chǎn)物 3’末端通常會(huì)加上 1 個(gè)多余的腺嘌呤。
l 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq DNA 聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為 1×10-5。
l 建議在冰上配置 PCR 反應(yīng)液后，再放入PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性， 減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的PCR 結(jié)果。
l 如進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的 Taq 酶用量， 以增加 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。
l 本公司 Buffer 經(jīng)大量 PCR 反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成，然而對(duì)某些PCR 反應(yīng)存在一個(gè)最優(yōu)的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請(qǐng)購買本公司不含鎂離子的 buffer 和 MgCl2/MgSO4。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
