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產品說明
T4 DNA聚合酶是來源于T4噬菌體的DNA聚合酶，又名T4 gp43，分子量為104kDa，在T4噬菌體DNA復制中負責先導鏈和滯后鏈5’→3’方向的脫氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性強于DNA 聚合酶 I，不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)為通過點突變D219A改造，使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低，但保留了完整的聚合酶活性。
本公司T4 DNA polymerase 是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
單位定義
一個活力單位即在37℃條件下，30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
活性測定條件
1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，0.5mM DTT，0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)，37℃溫育
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融。
特點
? 無鏈置換活性
? 無5’-3’外切酶活性，不能進行切口平移
? 3’-5’外切酶活性極大地降低
? 熱失活：75°C for 20 min
應用
? 縫隙填充(無缺口平移活性)
? 去除3’突出單鏈或補平5’突出單鏈，形成平末端
? 生成無縫克隆中的5’突出端，實現基因和載體的互補配對
產品包裝規格及組成
Component | AE0502A | AE0502B |
T4 DNA polymerase(exo-) | 200U | 1kU |
10×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
0.1% BSA（1mg/ml） | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶保存液
20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，10 mM MgCl2，5mM DTT，50% Glycerol，pH 7.5。
相關產品
AE1904: T4 gene 32（T4 SSB）
應用實例
1.補平5’突出單鏈，形成平末端
1）按下表配制反應體系
反應組分 | ul |
10×Buffer | 2 |
2mM dNTP | 2 |
底物：3’突出或5’突出DNA | 100ng-1μg |
T4 DNA polymerase (5U/μl) | 1 |
0.1%BSA | 2 |
H2O | Xul |
總體積 | 20 |
2）37℃×30min反應，
3）75℃×15min失活酶，
按需進行后續實驗。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 適用于凹陷單鏈區聚合補平反應（聚合酶反應）的緩沖液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA連接酶反應緩沖液。
l 鑒于AM Buffer B2是此酶最優Buffer，當使用不包含BSA的緩沖液時，建議補充BSA。
l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。
l 離子強度超過100 mM時活性將被抑制，SH基的還原劑促進活性。
l 活性易受模板DNA高級結構影響，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以顯著提高聚合酶活性。
