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產品說明
KlenTaq-S測序酶是Taq DNA聚合酶的改造版，為Taq DNA聚合酶的大片段，并做了基因突變。本酶具有 5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA聚合酶，KlenTaq-S測序酶具有很強的ddNTP的滲入能力，因此其適用于終止法DNA測序或焦磷酸解反應SNP分析。
本公司KlenTaq-S測序酶是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在72℃下， 1×AM PCR Buffer 1，30 min內將10 nmole dNTP摻入酸不溶性物質所需的酶量。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點
? 尤其適合ddNTP等修飾核苷酸的摻入反應
? 相比全長Taq DNA聚合酶，本酶比活性有所降低
適用范圍
? ddNTP終止法DNA測序（一代測序）
? 焦磷酸解反應延伸法SNP分析
產品包裝規格及組成
Component | AE0131A | AE0131B | AE0131C | AE0131D |
KlenTaq-S 測序酶 | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×AM PCR Buffer 1 | 0.5ml | 1.0ml×3 | 5ml×2 | 5ml×5 |
質量控制
相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR 方法檢測無宿主殘余 DNA。室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20 度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween20, and 50% glycerol.
使用實例：
以下反應舉例為 50 μl 標準PCR 體系，僅供參考。實際PCR 條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。
1）按下表配制反應體系
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×AM PCR Buffer 1 | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
KlenTaq-S測序酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*模板DNA用量參數(50 μl反應體系):
人基因組DNA100-1000 ng ; 微生物基因組DNA 10-100ng；PCR產物 1 ng-10 ng；Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl。
2）按如下條件進行反應，
95℃ | 2-5 min | |
95℃ | 15 sec | 25-35 Cycles |
55~72℃ | 20 sec | |
72℃ | 1kb/min | |
72℃ | 5 min |
3）瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物，或按實驗目的進行后續操作。
注意事項
l PCR條件和野生型Taq DNA聚合酶類似，對特定DNA的測序反應可能需要優化。
l 本酶擴增能力較野生型Taq DNA聚合酶有所降低，PCR產量有所降低，不建議用于常規PCR。
l 不可用于Taqman探針法q-PCR。
