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注：分為是否含有電泳染料兩種規格，內含染料規格 PCR 結束后直接上樣。

產品說明：

本產品一步法RT-PCR 2×SuperMix為RT-PCR反應的專用預混液。可用于RNA分子的擴增和定性分析，樣本類型可以是總RNA、mRNA、核糖體RNA、tRNA等。本產品包含MMLV反轉錄酶2.0、RNase Inhibitor、熱啟動型 Taq DNA聚合酶、dNTPs和優化的反應緩沖液，濃度為2×。核心組分之一MMLV RTase2.0經基因工程改造，熱穩定性顯著提高，可以耐受55-60度，使得反轉錄反應可以在50-55度進行，從而消除了RNA二級結構對反轉錄的抑制作用。MMLV2.0把RNA鏈轉化成cDNA鏈后，另一關鍵酶組分熱啟動Taq DNA聚合酶以cDNA鏈為模板，合成雙鏈DNA。Buffer專門針對RT-PCR進行了優化，非常適合于一步法進行RT-PCR反應，RT-PCR 反應時，只需加入RNA模板、引物和水，使2×SuperMix溶液的濃度為1×即可進行反應。

特點：

?  一步法高溫下進行RT-PCR反應，操作簡單，避免開蓋造成污染；

?  含有核酸酶抑制劑，可以防止RNA分子的降解；

?  反應Buffer經過優化，同時滿足RNase和Taq DNA聚合酶的反應條件；

?  反轉錄反應可以在50-55度進行，從而消除了RNA二級結構對反轉錄的抑制作用。

適用范圍：

目的RNA的RT-PCR擴增，制備mRNA及其它RNA分子的雙鏈DNA。

保存：

4度保存1個月；-20℃保存1年。

應用舉例：一步法高溫 RT-PCR

一步法 RT-PCR 將 RNA 反轉錄合成 cDNA、目標 cDNA 的 PCR 反應合二為一。以下反應舉例為 50 μl 標準一步法RT-PCR 體系， 僅供參考。實際 RT-PCR 條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。

1.在無RNase A污染的PCR管中配制如下混合液

* Total RNA 的使用量一般為 10 ng～1 μg；mRNA 的使用量一般為 1ng～1 μg

2.按下列條件進行RT-PCR反應

RT-PCR 反應條件

l    

RT-PCR 反應注意事項

l  本反轉錄反應條件適合絕大多數RNA，如RNA模板結構復雜，可將反轉錄溫度提高到55度，以提高反轉錄效果。

l  常規擴增條件的退火溫度可以根據引物的Tm值進行調整，當Tm較高時可以提高退火溫度，增加擴增條帶的特異性

l  對于短于300bp的擴增片段，常規擴增條件下72度延伸15秒即可；退火延伸一步法擴增條件下60-68度衍生30秒即可。

l  一般來說反應體系中引物終濃度為0.2μM即可得到較好的擴增效果。當反應性能比較差時，可以在終濃度0.1 - 1.0 μM范圍內調整引物濃度。

注意事項：

l  本品在4度保存1個月內穩定，盡量避免反復凍融，以免造成酶活下降。如每次使用量較少，推薦小份分裝使用。

l  使用前請上下顛倒以混勻Master Mix，短暫低速離心后即可使用。請勿vortex以免酶失活，影響定量結果。

l  加樣過程中輕柔吹打，如果操作不慎導致SuperMix起泡，需離心方可使用。

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